79.有關數位 PCR(digital PCR, dPCR)的技術原理及應用,下列敘述何者最不適當?
(A)運用樣本分割(sample partitioning)技術,每個 DNA 分子在分割單元內進行獨立的 PCR 擴增反應
(B)採用二進制定量(binary quantification)分析,對樣本 DNA 進行相對定量
(C)此技術是進行 PCR 反應後,偵測分割單元內的螢光訊號
(D)此技術具有極高的敏感度(sensitivity),適合檢測樣本中低拷貝數的標靶 DNA
統計: A(51), B(173), C(69), D(80), E(0) #3818554
詳解 (共 1 筆)
Digital PCR 是一種基於 PCR 反應 (DNA 聚合酶鏈鎖反應) 的單分子絕對定量技術。在 Digital PCR 的過程中:
(1) PCR 反應體系 (含有螢光染料或探針) 被分割為數以萬計的均一微液滴。 (A)
(2) 其中部分微液滴內會含有一個或多個模板。
(3) 將這些微液滴收集到試管內進行 PCR 反應,其中含有模板的微液滴會產生擴增產物,由此具有較強的螢光,成為陽性微液滴。
(4) 在 PCR 反應完成後,依次對每個微液滴內的螢光進行檢測。 (D)
(5) 根據微液滴信號的峰值高度,繪製出微液滴螢光分佈的散點圖。
(6) 透過合理的螢光分類閾值,將微液滴內的螢光強度數位化,判斷出其中具有較強螢光的陽性微液滴視為“1”和具有較弱螢光的陰性微液滴視為“0”,並透過“1”和“0”的個數來實現絕對定量。 (B)
因此它與即時定量 PCR 不同,Digital PCR 不需要使用標準曲線,即可直接對核酸拷貝數的絕對值進行定量。

參考資料:
https://www.unimed.com.tw/news_blog_detail.php?id=28
https://case.ntu.edu.tw/blog/?p=35490