藥典無菌試驗法

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建立於 2026年10月25日

學習重點 掌握微孔濾膜過濾法與直接接種法的操作差異，以及眼用含抗生素製劑、醫療器材的選用規定。 分辨硫醇乙酸鹽培養基 I、II與大豆分解蛋白質－乾酪素培養基的用途及適用試驗菌種。 熟記本單元所列藥典版本的數字：濾膜孔徑0.45 μm；第七版濾膜法培養觀察7 天以上，直接接種法14 天以上。 知道無菌試驗用培養基以高壓蒸氣滅菌，並能判斷非抗生素固體注射劑批量為 2000 支時，最低取樣數為20 支。 核心觀念 一、無菌試驗的目的與方法選用 無菌試驗是將檢品依規定處理並培養，檢查是否存在可生長的微生物。判讀結果的前提，是培養基能支持微生物生長，而且檢品中的抗菌成分不會干擾檢查；若微生物因殘留藥物而無法生長，可能形成偽陰性。 比較項目微孔濾膜過濾法直接接種法 基本操作使經適當處理的檢品通過濾膜，將微生物截留，再將濾膜置入培養基培養將規定量檢品直接加入適當培養基中培養 選用考量檢品須能依規定處理並進行過濾；可配合沖洗減少抑菌成分干擾適用於依規定採直接接種的檢品，包括不適用濾膜法的醫療器材 本單元孔徑0.45 μm不使用濾膜 第七版培養觀察期至少 7 天至少 14 天 Neomycin Sulfate and Prednisolone Acetate Ophthalmic Suspension，即硫酸新黴素與醋酸潑尼松龍眼用懸液劑，依本單元藥典規定採微孔濾膜過濾法。新黴素具有抗菌作用，檢查時須避免殘留抗菌活性抑制微生物生長。不可僅看到「懸液劑」，就認定一定採直接接種法；也不可推論所有含抗生素製劑都能不經適當處理直接過濾。 醫療器材另有適用限制：除標示為「無菌具管路醫療器材」者外，所有醫療器材均不適用微孔濾膜過濾法。判斷時先看器材類別與適用性，不能只靠更換濾膜孔徑或材質解決。 本單元的方法選擇以微孔濾膜過濾法及直接接種法為核心；細胞表面抗原檢測法、血瓶微生物培養法，均不是此處應選的藥典無菌試驗方法。 二、培養基的選擇 培養基用途與判斷關鍵應記菌種 硫醇乙酸鹽培養基 I用於好氧菌與厭氧菌的無菌試驗；須與混濁、黏性製劑使用的 II 型區別適用試驗可用金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、產芽孢梭菌；不選白色念珠菌 硫醇乙酸鹽培養基 II適用於混濁或具黏性製劑的好氧菌或厭氧菌檢查最適合培養的代表菌為產芽孢梭菌 大豆分解蛋白質－乾酪素培養基用於微量好氧菌或黴菌的無菌試驗白色念珠菌屬真菌，應與此培養基連結記憶 硫醇乙酸鹽培養基具有還原作用，有利於厭氧菌生長，但不能因此把其用途限縮為「只檢查厭氧菌」。尤其硫醇乙酸鹽培養基 II，既要記住混濁、具黏性的製劑特性，也要記住產芽孢梭菌這個代表菌種。 產芽孢梭菌（Clostridium sporogenes）是厭氧菌；當比較對象為金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌及枯草桿菌時，應以產芽孢梭菌作為硫醇乙酸鹽培養基 II 的最佳對應。 白色念珠菌是酵母菌，屬真菌，並非細菌。因此，在硫醇乙酸鹽培養基 I 的培養基適用試驗菌種中，不能把它與金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、產芽孢梭菌視為同一組。 大豆分解蛋白質－乾酪素培養基的英文名稱為 soybean-casein digest medium。看到「微量好氧菌」「黴菌無菌試驗」時，都應想到此培養基，而非依一般真菌培養印象選馬鈴薯葡萄糖瓊脂。 三、培養基製備、滅菌與適用試驗 依本單元中華藥典第五版規定，無菌試驗所需培養基應採高壓蒸氣滅菌。過濾滅菌、氣體滅菌與紫外光照射均不是此處的正確選擇。不要因培養基呈液態，就直接判定應採過濾滅菌。 培養基適用試驗的重點是確認培養基能支持指定微生物生長。這與檢品的無菌試驗目的不同：前者檢查培養基的生長支持能力，後者檢查檢品是否有可生長的微生物。培養基已經滅菌，不代表其生長支持能力必然合格。 四、培養觀察期與最低取樣數 依本單元所列中華藥典第七版，微孔濾膜過濾法應培養觀察7 天以上，直接接種法應培養觀察14 天以上。「以上」表示最低觀察期間，不能解讀為提早未見生長即可結束。這組天數須連同藥典版本記憶，避免套用到其他版本或規範。 依本單元所列中華藥典第五版取樣規定，非抗生素固體注射劑一批製造2000 支時，無菌試驗的最低取樣數量為20 支。此批量適用比較批量的 2% 與 20 支、取較少者：2000 × 2%＝40 支，與 20 支比較後取20 支。須分清楚批次取樣支數與每支實際取用的檢品量，兩者不是同一概念。 常考陷阱 把無菌試驗與過濾滅菌混為一談：本單元無菌試驗濾膜孔徑為 0.45 μm；不可因熟悉除菌過濾常見的 0.22 μm 而選錯。2.2、4.5 μm 也是錯誤數字。 培養天數對調：第七版是濾膜法至少 7 天、直接接種法至少 14 天；3 天、21 天均非本單元答案。 只看「厭氧菌」而忽略製劑特性：同時出現混濁或具黏性時，應選硫醇乙酸鹽培養基 II。 把黴菌常用培養基當成藥典答案：此處黴菌無菌試驗選大豆分解蛋白質－乾酪素培養基；馬鈴薯葡萄糖瓊脂、甘露糖醇鹽瓊脂、四硫酸鹽及乳糖培養基均非相應用途的答案。 把念珠菌當細菌：白色念珠菌不適合作為本單元硫醇乙酸鹽培養基 I 的適用試驗菌種。 忽略醫療器材的限制：除無菌具管路醫療器材外，應判斷為不適用濾膜法，並非選某種孔徑或 PE 材質濾膜。 取樣比較方向錯誤：2000 支批量的 2% 是 40 支，但最低取樣數為 20 支，不能誤取較多者。 記憶口訣 「濁黏用二，梭菌對應」：混濁或具黏性製劑用硫醇乙酸鹽 II，代表菌為產芽孢梭菌。 「大豆養黴，也養微好氧」：大豆分解蛋白質－乾酪素培養基用於黴菌及微量好氧菌。 「孔徑四五；七版濾七、直接十四」：孔徑 0.45 μm，並連同版本記住最低培養觀察期。