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學習重點 辨認逆相層析系統：C8、C18 與 ODS 都是常見的非極性固定相，會滯留親脂性分析物。 背熟本單元的溶劑強度排序：四氫呋喃（THF）＞乙腈（ACN）＞甲醇（MeOH）＞水。 比較混合移動相時，要同時看有機溶劑種類、有機相總比例及水相比例。 連結沖提力與滯留時間：其他條件相同時，逆相移動相沖提力越強，分析物越早沖出，滯留時間越短。 區分「常用的有機修飾劑」與「任何有機溶劑」：甲醇、乙腈、四氫呋喃是常用修飾劑；氯仿與乙酸乙酯不是含水逆相系統的常用溶媒。 核心觀念 一、先確認固定相，再判斷溶劑強弱 逆相液相層析使用非極性固定相，搭配相對較極性的移動相。常見固定相有三種： C18：十八碳烷基鍵結固定相。 ODS：十八烷基矽烷固定相，即 C18。 C8：八碳烷基鍵結固定相。 三者都依逆相層析的原則判斷。 親脂性分析物容易與非極性固定相作用而被滯留。移動相的有機溶劑比例提高時，分析物較容易隨移動相離開管柱，滯留就減少。遇到 prednisolone、betamethasone 或 hydrocortisone 等類固醇的題目，先確認是逆相系統，再比較移動相組成。 在相同管柱、流速、溫度及其他分析條件下：沖提力越強，滯留因子越小，滯留時間越短；沖提力越弱，滯留時間越長。 二、有機修飾劑的種類與溶劑強度 有機修飾劑是加入水相中的有機溶劑，用來調整沖提能力及分離選擇性。本單元的標準強弱關係如下： 溶劑常用縮寫逆相沖提力比較判斷重點 四氫呋喃THF最強有機相比例相同時，沖提力比乙腈、甲醇更強 乙腈ACN次強有機相比例相同時，比甲醇更能縮短滯留 甲醇MeOH較弱有機相比例相同時，分析物保留較久 水Water最弱水相比例增加，親脂性分析物的滯留增加 依此類推，比較水與含相同比例甲醇、乙腈、四氫呋喃的水溶液時，沖提力依序為：水／THF ＞ 水／ACN ＞ 水／MeOH ＞ 水。例如三種有機溶劑都占 50% 時，含 THF 者沖提力最強。 這個排序是本單元的作答依據。實際開發方法時，溶劑種類也會改變選擇性，不同分析物的滯留變化不一定相同，體積百分比也不能當成可以精確相加的溶劑強度數值。 三、常用溶劑必須能與水形成均勻移動相 甲醇、乙腈與四氫呋喃都能與水互溶，可以和水調配成不同組成來調整沖提力，是本單元要辨認的逆相有機修飾劑。 氯仿與乙酸乙酯和水的互溶性有限，不是一般含水逆相 HPLC 的常用修飾劑。以下兩類題目要特別留意這兩個選項： 以 C18 管柱分析類固醇，要求選出不適用的移動相溶劑。 要求辨認逆相層析法的非常用溶媒。 這個判斷只限於一般含水逆相系統。不要擴大成「氯仿或乙酸乙酯不能用於任何液相層析」；它們能否用於其他層析模式，是另一個問題。 四、同一種有機溶劑：比例越高，沖提力越強 比較同一種有機溶劑與水的混合液時，直接看有機相比例。例如ACN／水＝50／50 的沖提力大於 ACN／水＝40／60，前者使親脂性分析物的滯留時間較短。 若選項同時有純乙腈、乙腈／水等比例混合液、純甲醇及純水，沖提力依序為： 純乙腈＞純甲醇＞乙腈／水＝50／50＞純水 純乙腈能使親脂性分析物最快沖出，滯留時間最短。純水雖然極性最高，但在逆相系統中沖提力最弱。 五、三元移動相：先辨認成分，再合計有機相 三元配方不能只看第一個數字。先把每個成分與比例一一對應，找出水相比例，再合計有機相。例如 ACN／THF／水＝50／10／40，含 50% 乙腈與 10% 四氫呋喃，有機相總比例為 60%。 與 ACN／水＝50／50 相比，這個三元配方用 10% THF 取代部分水，有兩個效果：有機相總比例提高，而且加入的是沖提力較強的 THF。因此它的沖提能力更強。再與 ACN／水＝40／60 比較，整體順序為： ACN／THF／水＝50／10／40 ＞ ACN／水＝50／50 ＞ ACN／水＝40／60 同一配方也可能寫成 ACN／水／THF＝50／40／10。成分的排列位置不同，但實際組成相同，沖提力也相同，依然是三者中最強。 六、有機相總量相同時，改看溶劑種類 如果每個選項都是 70% 水、30% 有機相，水相比例分不出強弱，就要比較有機相的組成。依 THF＞ACN＞MeOH 的原則： 以 THF 取代部分乙腈，沖提力增強。 以甲醇取代部分乙腈，沖提力減弱。 因此這類配方的沖提力依序為： ACN／THF／水＝15／15／70 ＞ ACN／水＝30／70 ＞ ACN／MeOH／水＝15／15／70 ＞ MeOH／水＝30／70 若題目問 hydrocortisone 在 C8 管柱的最長滯留時間，要選沖提力最弱的 MeOH／水＝30／70。滯留時間的長短順序與上面的沖提力順序相反。 常考陷阱 「水的極性最高，所以沖提力最強」：這是把正相與逆相搞混了。在逆相系統中，水是所列溶劑中沖提力最弱的。 「有機溶劑比例相同，沖提力就相同」：比例相同時仍要比較種類，沖提力依序為 THF＞ACN＞MeOH。 「乙腈比四氫呋喃強」或「甲醇比乙腈強」：都不符合標準排序。判斷依據是 THF＞ACN＞MeOH＞水，對應選項的寫法就是 ③①④②。 只看乙腈比例，忽略 THF：三元配方中的 THF 也是有機相，不能當成水，也不能漏算。 照數字位置背配方：成分順序改寫時，數字要跟著溶劑名稱解讀。50／10／40 與 50／40／10 是否為同一配方，要先看各數字對應哪個溶劑。 「沖提力最大」與「滯留時間最長」選同一個配方：兩者方向相反。問最長滯留，找最弱的移動相；問最短滯留，找最強的移動相。 「能溶解分析物，就適合作逆相移動相」：還要考慮能否與水混溶，以及是否適用於該系統。氯仿與乙酸乙酯都不是常用的含水逆相修飾劑。 記憶口訣 「四、乙、甲、水，逆相強到弱」：四氫呋喃＞乙腈＞甲醇＞水。 「有機多，沖得快；水分多，留得久。」適用於同一種有機溶劑、其他條件相同的比較。 「先看種類與比例，問到滯留反著比。」三元配方先對名稱、再算有機相，最後依題意判斷最長或最短滯留時間。 「氯仿、乙酯不溶水，逆相溶媒排除它。」辨認非常用或不適用的逆相溶劑時使用。