肌酸酐測定方法

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建立於 2026年10月31日

學習重點 Jaffe 法測肌酸酐：肌酸酐與鹼性苦味酸鹽反應，形成橙紅色產物，於約 500 nm 測量吸光值；在本單元比較的方法中，特異性最低。 Jaffe 法干擾方向：糖尿病酮酸中毒可能造成正干擾；膽紅素通常造成負干擾。 過氧化氫酵素法：依序由 creatininase、creatinase、sarcosine oxidase 與 peroxidase 完成轉換及顯色。 分清不同酵素：creatininase 將肌酸酐轉為肌酸；creatinine deaminase 則產生氨，兩者不可混稱。 依指示反應判讀訊號：銨離子選擇性電極偵測銨離子生成；LDH 偶聯反應測 NADH 在 340 nm 的吸光值下降。 核心觀念 一、Jaffe reaction：鹼性苦味酸鹽測定肌酸酐 Jaffe 法是測定肌酸酐（creatinine）的非酵素方法。肌酸酐在鹼性環境中與苦味酸鹽（picrate）反應，形成橙紅色產物，再於約 500 nm測量吸光值。 苦味酸（picric acid）搭配NaOH可提供反應所需的鹼性苦味酸鹽環境。必須分清楚：肌酸是 creatine，肌酸酐是 creatinine；Jaffe 法的測定對象是後者。 Jaffe 動力學法在選定時間區間測量吸光值的變化速率，以推算肌酸酐濃度。利用不同物質反應速率的差異，可減少部分干擾，但不能完全消除非肌酸酐物質造成的影響。 二、Jaffe 法的特異性與干擾 除肌酸酐外，部分物質也能與鹼性苦味酸鹽反應，或影響測定訊號，因此 Jaffe 法的特異性較差。在 Jaffe 法、creatininase／creatine kinase 法、creatinine deaminase 法及 creatininase／sarcosine oxidase 法之間，Jaffe 法的特異性最低。 情況典型影響判讀重點 糖尿病酮酸中毒正干擾，結果偏高酮體中的 acetoacetate 可參與反應，使肌酸酐被高估。 膽紅素升高、黃疸負干擾，結果偏低膽紅素可干擾反應，使測得的肌酸酐偏低。 採用動力學測定減少部分干擾仍不能視為完全專一的測定。 正干擾指測得值高於實際值；負干擾指測得值低於實際值。不能僅因檢體顏色較深，就認定一定造成正干擾。 三、creatininase－creatinase－H2O2 酵素法 此法將肌酸酐逐步轉換為過氧化氫，再利用過氧化酶顯色。反應順序如下： Creatininase：肌酸酐＋水 → 肌酸。此酶又稱 creatinine amidohydrolase，屬於水解酶；這一步不生成氨。 Creatinase：肌酸＋水 → sarcosine（肌胺酸）＋尿素。此酶也屬水解酶，因此此測定系統確實可生成尿素。 Sarcosine oxidase：使 sarcosine 氧化，生成 glycine、formaldehyde 與 H2O2。 Peroxidase：利用 H2O2 氧化顯色試劑，形成有色產物，再以吸光值推算肌酸酐濃度。 因此，creatininase 與 creatinase 都是 hydrolase；sarcosine oxidase 負責產生 H2O2；peroxidase 負責後續顯色。僅有 creatininase 與 peroxidase，無法完成這條反應鏈。 這套方法需要的是sarcosine oxidase，不能以 creatine kinase、glucose-6-phosphate dehydrogenase 或 pyruvate dehydrogenase 取代其功能。 四、抗壞血酸干擾須看試劑設計 抗壞血酸（ascorbic acid，維生素 C）具有還原性；在未排除其作用的 H2O2 顯色系統中，可能消耗過氧化氫或影響顯色，造成負干擾。然而，部分肌酸酐酵素試劑會加入 ascorbate oxidase 等設計，排除抗壞血酸的影響。 因此，不可將「ascorbic acid 會造成負干擾」當成所有 creatininase－creatinase－H2O2 測定的必然性質。本單元對此類方法的判讀重點是：不能一概認定抗壞血酸會造成負干擾。也不能因此反推抗壞血酸一定造成正干擾；實際影響取決於試劑及其抗干擾設計。 五、creatinine deaminase：直接偵測銨離子生成 Creatinine deaminase又稱 creatinine iminohydrolase，可使肌酸酐轉為 N-methylhydantoin，並釋出氨。此法可直接搭配銨離子選擇性電極，偵測銨離子的生成速率，以反映肌酸酐濃度。 此反應不必搭配 creatine kinase 才能測氨。離子選擇性電極偵測的是相應離子的訊號，也不能用來直接測量 NADH 的消耗。 六、creatine kinase 偶聯法與 LDH 指示反應 Creatininase 可先將肌酸酐轉為肌酸，再由creatine kinase催化肌酸與 ATP 反應，形成 phosphocreatine 與 ADP。ADP 可經 pyruvate kinase 偶聯反應產生 pyruvate，最後由 lactate dehydrogenase（LDH）進行指示反應。 LDH 指示反應：pyruvate＋NADH＋H+ → lactate＋NAD+。由於 NADH 在 340 nm 有明顯吸收，反應進行時 NADH 被消耗，因此測量的是340 nm 吸光值下降。 方法或最後反應主要測量訊號 Jaffe 法約 500 nm 的有色產物吸光值 Sarcosine oxidase／peroxidase 系統H2O2 所帶動的顯色訊號 Creatinine deaminase 搭配銨離子選擇性電極銨離子生成速率 以 LDH 作最後指示反應NADH 在 340 nm 的吸光值下降 常考陷阱 「Picrate 結合 creatine 定量」：受測物寫錯；Jaffe 法測的是 creatinine。 「苦味酸不需要鹼性條件」：錯；NaOH 提供反應所需的鹼性環境。 「黃疸造成正干擾」：本單元應判為錯誤；膽紅素通常造成負干擾，酮酸中毒則可能造成正干擾。 「Creatininase 生成肌酸與氨」：錯；creatininase 水解肌酸酐生成肌酸，釋出氨的是 creatinine deaminase 途徑。 「Creatinase 將肌酸酐轉成肌酸」：錯；creatinase 的受質是肌酸，產物為 sarcosine 與尿素。 「維生素 C 必然使過氧化氫酵素法偏低」：過度概括；須考慮試劑是否已排除抗壞血酸干擾。 「LDH 指示反應測 ATP、氧氣或 tungsten blue」：錯；應看 NADH 在 340 nm 的吸光值變化。 記憶口訣 「苦鹼測酐五百光，酮體偏高膽紅降。」 「酐先成肌，肌生肌胺加尿素；氧化生雙氧，過氧酶顯色。」 「去胺測銨離子；LDH 看三四零，NADH 下降。」